小鼠原代細胞是從小鼠的特定組織中提取出來的，則可直接得到目的基因不表達的原代細胞模型，且與我們在KO小鼠上的研究具有更好的承接性，從而讓我們想要證實的實驗?zāi)康母哂姓f服性。KO小鼠的原代細胞還可用于細胞水平的藥物篩選、藥物評價等方面。原代細胞（Primary cells）是指來源活體組織，經(jīng)特定分離方法制備而成的初始細胞。原代細胞離體時間短且不經(jīng)過永生化過程，其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保持原有的遺傳特征，可更好地反映細胞在體內(nèi)的生長狀態(tài)，從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù)。

　　小鼠原代細胞分離實驗步驟：

　　1、小鼠麻醉

　　根據(jù)體重計算相應(yīng)的麻醉劑量并腹腔注射（也可以用異氟烷進行空氣麻醉）

　　2、對*麻醉后的小鼠進行解剖，打開腹腔，找到小鼠下腔靜脈及門靜脈，使用滯留針插入下腔靜脈，將50-60ml的緩沖溶液一在10-20min內(nèi)緩慢注射進入小鼠血液循環(huán)內(nèi)，看到小鼠肝臟有明顯腫脹時剪開門靜脈，完成后改用緩沖溶液二進行沖洗。

　　3、沖洗完成后，將小鼠肝臟剪下，轉(zhuǎn)移至DMEM高糖培養(yǎng)基，用DMEM培養(yǎng)基清洗2-3次后，使用滅菌鑷子將肝臟在培養(yǎng)基內(nèi)撕開，使原代肝細胞從肝臟內(nèi)流出。

　　4、將分離得到的肝臟細胞過篩網(wǎng)篩選，過濾組織碎塊及其他雜質(zhì)，并對細胞混懸液離心，按照一定的離心力得到初步的肝細胞沉淀，此時的肝細胞中混雜著肝臟實質(zhì)細胞和非實質(zhì)細胞，需要使用percoll離心液進行梯度離心。

　　5、梯度離心后的細胞即為原代肝臟實質(zhì)細胞，重懸后計數(shù)即可用于后續(xù)的實驗，若對細胞純度存疑，也可以進行流式測定。