SKoV-3細胞培養人卵巢癌細胞

SKoV-3細胞培養人卵巢癌細胞

-----尚恩生物 186278592O3-----

培養環境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

細胞培養操作

換液周期：2-3天

培養基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰M，輕輕晃動培養瓶以使胰M鋪勻瓶底細胞層；

4.將培養瓶放入37度培養箱消化；

5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養基終止胰M消化；

6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的*培養基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養瓶里；

8.補足*培養基，將培養瓶放回培養箱靜置培養；

注意事項 不同品牌胰M消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間

消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。

三、細胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養基+8%DMSO(高手建議);

凍存規格：200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；

3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存

注意事項 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案

細胞培養說明

1. 細胞培養需要充足經驗，新手或者沒有類似細胞培養經驗的人建議在專業人士指導下進行操作，尤其注意無菌操作、貼壁細胞消化時間及細胞培養密度。

2. 部分細胞在傳代后時，會有以下現象：細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養基漂浮一些死細胞。以上都是細胞培養常見現象，不影響細胞增殖和實驗。

3. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡、細胞器折光或者細胞膜表面物質，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細胞庫細胞照片。細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片，可以吸走培養基后用PBS潤洗；潤洗不能清除的可以消化細胞重新接種，消化完成后加*培養基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用*培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

4. 不同品牌胰M溶液成分不一樣，消化活性差別比較大，更換胰M品牌時需重新摸索消化時間，以消化到細胞間隙變大但未漂浮為準，此時結束消化最佳，避免消化過度導致細胞死亡。細胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過大，不要產生過多氣泡，否則會嚴重影響細胞狀態。

5. 不同細胞生長速度差異較大，所有細胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養時生長較慢、密度較低的細胞需要傳代時按1:2傳代，生長較快、密度較高的細胞可以按1:4傳代。

6. 細胞生長偏慢時，可以將血清濃度增加到15-20%培養一段時間，待細胞狀態和生長速度恢復正常后換回10%血清

相關培養基均有售：

DMEM高糖

DMEM低糖

1640基礎培養基

1640*培養基

FK12

IMEM

L15

McCoy's 5A

優級胎牛血清

特級胎牛血清

新生牛血清

等...