A549細胞人肺腺癌細胞試劑盒

A549細胞人肺腺癌細胞試劑盒

---尚恩生物 186278592O3---

培養環境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

細胞培養操作

換液周期：2-3天

培養基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰M，輕輕晃動培養瓶以使胰M鋪勻瓶底細胞層；

4.將培養瓶放入37度培養箱消化；

5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養基終止胰M消化；

6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的*培養基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養瓶里；

8.補足*培養基，將培養瓶放回培養箱靜置培養；

注意事項 不同品牌胰M消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間

消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。

細胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養基+8%DMSO(高手建議);

凍存規格：200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；

3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存

注意事項 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案

細胞培養說明

1. 細胞培養需要充足經驗，新手或者沒有類似細胞培養經驗的人建議在專業人士指導下進行操作，尤其注意無菌操作、貼壁細胞消化時間及細胞培養密度。

2. 部分細胞在傳代后時，會有以下現象：細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養基漂浮一些死細胞。以上都是細胞培養常見現象，不影響細胞增殖和實驗。

3. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡、細胞器折光或者細胞膜表面物質，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細胞庫細胞照片。細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片，可以吸走培養基后用PBS潤洗；潤洗不能清除的可以消化細胞重新接種，消化完成后加*培養基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用*培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

4. 不同品牌胰M溶液成分不一樣，消化活性差別比較大，更換胰M品牌時需重新摸索消化時間，以消化到細胞間隙變大但未漂浮為準，此時結束消化最佳，避免消化過度導致細胞死亡。細胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過大，不要產生過多氣泡，否則會嚴重影響細胞狀態。

5. 不同細胞生長速度差異較大，所有細胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養時生長較慢、密度較低的細胞需要傳代時按1:2傳代，生長較快、密度較高的細胞可以按1:4傳代。

6. 細胞生長偏慢時，可以將血清濃度增加到15-20%培養一段時間，待細胞狀態和生長速度恢復正常后換回10%血清

關于售后：

1.所有細胞免費售后期為一周，一周內細胞培養出現異常及時拍照反饋。超出一周沒有任何反饋視為細胞培養正常，后期若出現培養問題不再免費重發。

2. 申請售后時請提供細胞收貨時及反饋售后當天細胞清晰照片及培養信息，若無清晰照片及相應信息，不予免費售后；若文件較多不方便在線聯系或傳送，可以向銷售索要細胞情況表，填寫后反饋給銷售。

3. 售后僅針對由于細胞自身狀態問題導致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內已經傳代或轉移細胞多次，出現死亡或者污染時不予免費售后；若客戶在我方未允許的情況下，擅自遺棄細胞，視為客戶自身問題導致細胞異常，不予免費售后。

4. 細胞在不同實驗室培養由于所使用培養基及血清品牌、個人操作習慣、培養瓶品牌等諸多培養條件不盡相同，導致細胞培養形態、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應環境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。

5. 凍存細胞發貨2管，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯系我方并在我方指導下復蘇第二支。若客戶未反饋并復蘇2管失敗，我方將不提供免費售后服務。凍存細胞售后均發復蘇培養的，若要重發凍存細胞，需補加干冰運輸費用。

6. 客戶自行凍存細胞一定要注意凍存后復蘇一管檢查凍存活性，避免凍存死亡導致絕種。我方不對客戶凍存細胞死亡負責，客戶凍存細胞死亡時不予免費售后。

7. 細胞收貨后，請收集發貨培養基培養至少一瓶細胞，用于確定細胞培養條件及實驗操作是否合適。

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