raw264.7細胞是一種鼠源的巨噬細胞系,RAW264.7細胞貼壁快,形態以類圓形和不規則為主,一般1~2個核,少數有3個核,胞漿伸展時胞體較大。細胞貼壁緊,胰酶-EDTA難以消化,需要多次消化吹打,也可采用細胞刮法。
raw264.7細胞培養注意事項:
1、具有很強的吞噬能力,當吞噬抗原后,細胞會釋放趨化因子,進一步促進細胞伸出偽足,增強粘附攀爬能力。細胞吞噬抗原過多、培養環境惡劣都會促進該細胞呈現梭形、長梭形,鏡下會看到具有細長偽足的小細胞被類似上皮的梭形大細胞取代。
2、每次傳代都很難消化下來。用力過大則對細胞損傷較大,這種細胞傳代時接種密度要大,否則容易使巨噬細胞向終末細胞分化,細胞變成長形,并且不能回復,這是培養這種細胞時需要注意的問題。
3、生長時喜歡結伴。正常生長狀態應該是一小片一小片的生長,片片之間不連接,等到長到更多更密的時候會連成大片,并且會疊加成層。所以,要很好地控制好細胞的生長速度,不要等到疊加成層的時候再傳代。
4、傳代后貼壁時間較短,半小時就能貼很多,剛貼壁是細胞呈圓形,折光度很好,鏡下觀察如小珍珠狀一個個地散落于瓶底面。生長一段時間后,部分細胞會變成類似四角形,伸出偽足之類的。這個時候就是提醒你注意傳代了,這部分細胞如再不傳代,很容易就老化掉。
raw264.7細胞破骨細胞分化:在RANKL的誘導下,RAW264.7細胞可以分化為成熟的破骨細胞,此時應用破骨細胞特異性的抗酒石酸酸性磷酸染色(TRAP染色),在有成熟破骨細胞的部位可見紅色的陽性反應,所以一般認為RAW264.7是一種前破骨細胞。 向破骨細胞的分化是一個NF-kb通路依賴的過程,先前的大量研究表明,NF-kb通路受到抑制時,RAW264.7細胞不能向破骨細胞的分化。