小鼠原代細胞培養(yǎng)技術日漸成熟,但在同樣實驗條件下不易獲得,而小鼠基因組與人類基因組有更多相似之處,具有更高的研究價值。改進小鼠乳鼠原代心肌細胞的培養(yǎng)方法,得到純度高、活力強、保持心肌細胞原有結構和功能的心肌細胞。
方法:將小鼠心肌組織利用酶消方法分離為單個的心肌細胞,實驗步驟中將經(jīng)典的胰酶、膠原蛋白酶混合酶消法分解開,先用胰酶消化心肌組織,使心肌組織變得松散,再用膠原蛋白酶,作用于細胞間質的膠原纖維,使心肌組織分離為單個的小鼠原代細胞。調整胰酶和IⅡ型膠原蛋白酶的濃度和作用時間,嚴格控制試劑pH值和各步驟的溫度。
結果與結論:心肌細胞在接種24h后開始貼壁,48h后可觀察到部分心肌細胞出現(xiàn)自主搏動,72h后彼此形成交聯(lián),96h后可觀察到心肌細胞形成細胞簇,并出現(xiàn)一致性搏動。心肌細胞的存活率和純度均達95%以上。結果證實,實驗采用改良方法成功培養(yǎng)出小鼠原代細胞,并且保留心肌細胞的結構和功能,純度和成活率高,是可行的培養(yǎng)方法。
小鼠原代細胞之所以大力培養(yǎng)原因是小鼠基因組與人類基因組有更多相似之處,具有更高的研究價值。國內外學者對通過培養(yǎng)原代乳鼠心肌細胞,從而進一步研究心肌細胞對缺氧、缺血等相關心臟疾病的發(fā)病機制進行了大量工作。大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)技術日漸成熟,但是小鼠心肌細胞在同樣實驗條件下不易獲得。采用混合酶消化心肌細胞,而是先用胰酶消化,后用膠原蛋白酶消化的實驗方法獲得心肌細胞,此種操作方法可得到純度高、活力強、保持心肌細胞原有結構和功能的心肌細胞。