293細胞是轉染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系,293T細胞由293細胞派生,同時表達SV40大T抗原,含有SV40復制起始點與啟動子區的質粒可以復制。用Ca3(PO4)2轉染效率可高達50%。蛋白表達水平高,轉染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達的蛋白。瞬時轉染293T細胞是過表達蛋白并獲得細胞內及細胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。
通常轉染效率與代數相關,建議選擇代數低的細胞進行轉染。如果質粒中含SV40復制起始點,可以選擇293T或293T/17。這些細胞貼壁不牢,特別是溫度低于30攝氏度時很容易卷曲脫落,建議使用Cellbind細胞培養瓶培養。
293細胞培養特性:
1、293細胞明顯適應酸性環境,pH值在6.9~7.1時,可順利貼壁生長,換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養基。
2、傳代:倒去廢液,PBS洗一次(輕),用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化,生長良好細胞,培養瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s,然后吸去,再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細胞變圓,就可加DMEM終止消化,反復吹打至細胞全成單個懸浮細胞即可。12小時-24小時90%以上細胞貼壁。293細胞傳代時機為達80-90%匯合,傳代比例為1:3。
3、293細胞在低代時容易貼壁,生長良好,在傳到幾十代以后,易聚集成團,且貼壁不牢,用PBS沖洗時即可能脫落,即使消化后也不容易吹打成單細胞懸液,購入時先大量凍存。
4、復蘇:293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍后復蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養瓶待細胞長滿瓶底的70%~80%時消化凍存,復蘇時將其全部接種至2個50ml瓶中時較為合適。剛復蘇的293貼壁很慢,復蘇接種后24小時內,應盡量減少觀察細胞次數或不作觀察,以免因晃動而影響細胞貼壁。復蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進行更換培養基比較合適,如果用一次性塑料培養瓶可增加細胞貼壁牢度。換液前宜將培養基預熱。